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大鼠核因子κB抑制物激酶(IKK)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發布時間:2024/10/29瀏覽:80次

  大鼠核因子κB抑制物激酶(IKK)ELISA試劑盒實驗使用說明書 本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標,本生,您信任的合作伙伴!本生試劑盒

  大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA檢測試劑盒試驗原理:

  大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。

  試劑盒內容及其配制

  


  自備材料

  1)蒸餾水。

  2)加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

  3)振蕩器及磁力攪拌器等。

  安全性

  1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

  2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

  3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

  操作注意事項

  1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

  2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

  3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

  4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

  5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

  6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

  7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

  8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

  9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

  樣品收集、處理及保存方法

  1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

  3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液

  5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  試劑的準備

  1)標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

  2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

  操作步驟

  1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

  2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。

  3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

  4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

  5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

  6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

  7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

  8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

  9)在450nm波長處測定各孔的OD值。

  局限

  6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到精確的結果。

  試劑盒性能

  1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

  2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

  3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

  結果判斷與分析

  1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

  2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。


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